Evaluación preliminar de dos métodos para el diagnóstico de la anemia infecciosa equina por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa
Preliminar evaluation fo two methods for the diagnosis of infectious quine anemia using the polimerase chain reaction technique
Resumen
La Anemia Infecciosa Equina (AlE), el “sida" de los caballos es una enfermedad infectocontaaiosa causada
por un Lentivirus de la familia Retroviridae. Se diagnostica en Colombia mediante pruebas serológicas tales como inmunodifusión (Coggins) y ELISA técnicas que eventualmente pueden arrojar resultados falsos positivos y falsos negativos, razón por la cual se crea la necesidad de estandarizar una prueba de Biología Molecular, como la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) que permita detectar la presencia o ausencia del virus en los animales. En el presente trabajo se evaluaron dos metodologías de PCR para la estandarización de dicha técnica, con fines de diagnóstico de la Anemia Infecciosa Equina. El método uno consistió en una técnica sencilla de PCR cuyos iniciadores “Primer A" (PA) y “Primer B" (PB) flanquean una región de 510 pares de bases (pb) correspondiente al gen gag del Virus de la Anemia Infecciosa Equina (VAIE). El método dos contempló la técnica de PCR anidada con los iniciadores externos “Primer E” (PE) y “Primer F” (PF) que flanquean una región de 780 pb; los “Primers C” (PC) y “Primers D” (PD), como
iniciadores internos que flanquean una región de 410 pb del gen gag del VAIE. Los resultados mostraron que el método uno permite amplificar segmentos compatibles con el gen gag del VAIE, pero solo en las muestras
controles positivos y no en las muestras del banco de ADN provenientes de animales serológicamente positivos al VAIE. El método dos permitió amplificar segmentos de aproximadamente 800 y 400 pb del gen gag del VAIE, tanto en las muestras controles positivos como en las muestras seropositivas del banco de ADN, indicando mayor sensibilidad que el método uno; sin embargo se presentaron bandas de carácter inespecífico de peso molecular de 300pb aproximadamente. Para la detección de| provirus AIE en muestras de sangre de equinos asintomáticos, se recomienda emplear la modalidad de PCR anidada. Equine Infectious Anemia (EIA) is an illness caused by a Lentivirus of the familiy Retroviridae. It is diagnosted in Colombia through serological sam pling such as immunodiffusion (Coggins) and ELISA techniques, based
on the detection of antibodies. These may eventually show results either falsely positive or falsely negative. reasons for which it is necesary to standarise a technique in Molecular Biology, such as the Polimerase Chain Reaction (PCR), that assures the presence or absence of the virus in the animals. In this work two PCR methods were evaluated for the standarisation of this technique to diagnose Equine Infectious Anemia. The first method consisted of a simple PCR technique whose ¡nitiators Primer A (PA) and Primer B (PB) delimit a región of 510 base pairs (pb) corresponding to the gag gen from the Equine Infectious Anemia Virus (EIAV). The second method examined the nested PCR with the external primers E (PE) and primer F (PF) delimited a región of 780pb and primers C (PC) and primers D (PD) as internal initiators which delimit a región of 41 Opb also from the gag gen from the AIEV. The results show that method one allows the amplification of segments compatible with the gag gen from the EIAV, but only in positive control samples, not in the samples from the DNA bank coming from animals serologically positive to EIAV. The second method permitted the amplification of segments approximately 800 and 400 pb fron the gag gen from EIAV both in the positive control
samples such as the seropositive samples from the DNA bank, demostrating greater sensitivity than method one; nevertheless bands were observed that appeared in an unspecific way with a molecular weight of approximately 300pb. For the detection of the provirus EIA in blood samples of asymptomatic equines, it is recommeneded to employ the nested PCR. Incluye referencias bibliográficas