Productos de alto consumo contaminados con Listeria monocytogenes como el queso fresco han sido reconocidos como ruta importante de transmisión de listeriosis, enfermedad que presenta altos índices de mortalidad, en particular sobre miembros vulnerables de la población tales como neonatos, ancianos y pacientes inmuno- suprimidos. Debido a que el método estándar utilizado para la identificación de este microorganismo es laborioso y consume gran cantidad de tiempo, se propuso la validación de la técnica Reacción en Cadena de la Poli- mersa (PCR) para la detección rápida, sensible y confiable de L. monocytogenes. La metodología propuesta implicó un procedimiento de extracción de ADN basado en la precipitación alcohólica en presencia de Mal (sal cao- trópica) que redujo en gran medida los compuestos inhibidores en la muestra, permitiendo la detección directa de I x 1 OsUFC de L. monocytogenes /g de queso. La PCR basada en la especificidad de los iniciadores Ll 1 y UI reconoció el género Listeria al amplificar un fragmento de 938pb del rADM 16S y los iniciadores LF y LR que reconocieron el gen hlyA, típico de la especie monocytogenes, amplificando una banda de 750pb. La reproducibi- lidad de la PCR reportó 97% de concordancia observada, sensibilidad del 96,3% y especificidad del 100%. La técnica "Gold Standard", también evaluada como técnica comparativa reportó 100% para todos los parámetros estadísticos evaluados. Los resultados de la PCR fueron evidenciados en cuatro horas, lo que demuestra la factibilidad de implementar la PCR para la detección de L. monocytogenes en la industria de alimentos.High consumption producís, like fresh cheese, contami- nated with Listería monocytogenes have been recognized as an important transmission factor of listeriosis, a high risk mortality illness, particularely for vulnerable mem- bers of the population such as newborns, elderly people and inmuno compromised patients. Due to the fact that the Gold Standard method used to identify this micro- organism is a laborious and time consuming one, the validation of the Polymerase Chain Reaction (PCR) for a faster, sensible and reliable detection of L. monocytogenes was proposed. This methodology engaged a DMA extraction procedure based on alcoholic precipitation in presence of Mal (caotropic salt), method that reduced considerably the inhibitor compounds of the sample, allowing the direct detection of 1 x 1O’UFC of L. monocytogenes /g of cheese. The PCR based on the specificity of primers LI1 and U1 recognized the Listería gemís, ampli- fying a fragment of 938pb from rDMA 16S and the primers LF and LR which identified the gene hlyA, characteristic of the monocytogenes species amplifying a band of 750pb. The reproducibility of the PCR reported a 97% of observed concordance, sensitiveness of 96.3% and specificity of 100%. The Qold Standard technique was assessed for comparision, reporting 100% for the whole evaluated statistics parameters. The PCR results were evidenced in four hours, which proves the feasibility of PCR imple- mentation for the detection of L. monocytogenes in the food ¡ndustry.Incluye referencias bibliográficas